Numunenin sabah 7-10 arası (saat 8) alınması tavsiye edilir. Kan soğutulmuş EDTA’lı tüplere alınır. Bekletilmeden hemen soğutmalı santrifüj kullanılarak plazma ayrılır. Numunelerden bekletilmeden analiz yapılır veya bekletilecekse hemen -20 °C”de dondurulur. ACTH konsantrasyonları gün içinde değişkenlik gösterir: Sabahları yüksek ve akşamları düşüktür. ACTH tedavisi altındayken ACTH ölçümü önerilmez Yüksek dozda biotin (> 20 mg/gün) tedavi alan hastalarda son biotin uygulamasının ardından en az 24 saat geçmeden numune alınmamalıdır. Kortizol yükseklik ve düşüklük sebeplerinin araştırılması için kullanılır. Oda Sıcaklığı(20-25 °C) 2 Saat|Dondurucu(- 20 °C) 28 Gün.